शुद्ध संस्कृति तकनीक पर उपयोगी नोट्स – सूक्ष्म जीव विज्ञान में सबसे महत्वपूर्ण प्रयोगशाला प्रक्रियाओं में से एक | Useful Notes On Pure Culture Technique – One Of The Most Important Laboratory Procedures In Microbiology

Useful Notes on Pure Culture Technique – One of the Most Important Laboratory Procedures in Microbiology | शुद्ध संस्कृति तकनीक पर उपयोगी नोट्स - सूक्ष्म जीव विज्ञान में सबसे महत्वपूर्ण प्रयोगशाला प्रक्रियाओं में से एक

पहचान के लिए शुद्ध कल्चर प्राप्त करना सूक्ष्म जीव विज्ञान में सबसे महत्वपूर्ण प्रयोगशाला प्रक्रियाओं में से एक है। जब मिट्टी, पानी, भोजन या शरीर के नमूने पोषक तत्वों से युक्त पेट्री प्लेटों पर रखे जाते हैं, तो यह जल्दी से स्पष्ट हो जाता है कि प्रत्येक नमूने में विभिन्न प्रकार के रोगाणु होते हैं।

यह संक्रमण वाले रोगियों की त्वचा या श्लेष्मा झिल्ली से एकत्र किए गए नमूनों के लिए विशेष रूप से सच है। नैदानिक ​​नमूनों में सामान्य रूप से शरीर पर पाए जाने वाले हानिरहित रोगाणु (सामान्य वनस्पति) और रोग पैदा करने वाले रोगाणु दोनों होते हैं।

बीमारी के लिए कौन सा जीव जिम्मेदार है, इसकी सटीक पहचान करने के लिए, कई अलग-अलग प्रकार के रोगाणुओं को अलग किया जाना चाहिए। “पैराशन” के बाद, अलग-अलग रोगाणुओं को एक ऐसे माध्यम पर रखा जाना चाहिए जो उन्हें स्पष्ट रूप से दिखाई देने वाली आबादी, या कॉलोनी में प्रजनन करने की अनुमति दे, जो केवल एक प्रजाति से बना हो।

इस कॉलोनी के नमूनों को तब “उठाया” जा सकता है और आगे की वृद्धि और पहचान के लिए एक अलग संस्कृति में स्थानांतरित किया जा सकता है। माइक्रोबायोलॉजिस्ट तब आकृति विज्ञान, चयापचय और एंटीबायोटिक संवेदनशीलता जैसी विशेषताओं का अध्ययन करने में सक्षम होगा।

मिश्रित संस्कृतियों को अलग करने के लिए कई तकनीकों का उपयोग किया जाता है; हालांकि, स्ट्रीक प्लेट विधि और डालना प्लेट विधि दो सबसे आम हैं।

दोनों विधियों को ठीक से करने के लिए कौशल की आवश्यकता होती है, लेकिन स्ट्रीक प्लेट विधि शायद अधिक व्यावहारिक है। एक पोषक अगर माध्यम तैयार किया जाता है जो मिश्रित नमूने से पृथक जीव के सक्रिय विकास का समर्थन करने के लिए जाना जाता है।

यह माध्यम सभी विदेशी रोगाणुओं को हटाने के लिए निष्फल है और यह सुनिश्चित करता है कि पेट्री प्लेट पर केवल नमूने से रोगाणु ही विकसित होंगे। नमूने को पेट्री प्लेट में स्थानांतरित करने के लिए इनोकुलेटिंग सुई या इनोकुलेटिंग लूप नामक विशेष तारों का उपयोग किया जाता है।

संदूषण को रोकने के लिए इन्हें भी निष्फल किया जाना चाहिए। यह तार को एक खुले बन्सन बर्नर फ्लेम या अन्य ताप उपकरण में रखकर पूरा किया जाता है ताकि सभी रोगाणुओं को भस्म करके नष्ट किया जा सके।

ठोस मीडिया पर बढ़ने वाले रोगाणुओं को स्थानांतरित करने के लिए इनोकुलेटिंग सुइयों का उपयोग किया जाता है क्योंकि सुई लूप की तुलना में कम कोशिकाओं को ले जाएगी। लूप का उपयोग तरल से रोगाणुओं को स्थानांतरित करने के लिए किया जाता है क्योंकि यह शोरबा संस्कृति में फैले हुए रोगाणुओं को अधिक धारण करेगा।

रोगाणुओं को अलग करने के लिए उपयोग किए जाने वाले स्ट्रीकिंग पैटर्न प्रयोगशाला से प्रयोगशाला में भिन्न होते हैं, लेकिन प्रत्येक पैटर्न का उद्देश्य समान होता है। रोगाणुओं को एक छोटे से केंद्रित क्षेत्र में अग्र सतह पर रखा जाता है और इनोकुलेटिंग लूप को जला दिया जाता है।

फिर लूप का उपयोग नमूना, या इनोकुलम को प्लेट के दूसरे भाग में फैलाने के लिए किया जाता है, इस प्रकार कम रोगाणुओं को एक बड़े क्षेत्र में फैलाया जाता है। यह बुनियादी तकनीक तब तक दोहराई जाती है जब तक कि अलग-अलग कोशिकाओं को इतनी दूर नहीं ले जाया जाता है कि प्रत्येक कोशिका एक अलग कॉलोनी में विकसित हो सकती है।

चूंकि प्रत्येक कॉलोनी द्विआधारी विखंडन के परिणामस्वरूप विकसित हुई है, इसके भीतर सभी कोशिकाएं एक ही प्रजाति के हैं। प्रत्येक शुद्ध कॉलोनी को एक टीका सुई और कोशिकाओं को आगे के परीक्षणों के लिए नए, बाँझ मीडिया में स्थानांतरित करके “उठाया” जा सकता है।

डालना प्लेट विधि में अग्र प्लेटों की सतह पर रोगाणुओं को अलग करना शामिल नहीं है, लेकिन तरल, ठंडा मीडिया के भीतर अलगाव है। टेस्ट ट्यूब में स्टेरिल एगर को लगभग 48°-50°C रखा जाता है। इस तापमान पर, अधिकांश बैक्टीरिया को मारने से रोकने के लिए अगर पर्याप्त ठंडा होगा, फिर भी तरल रूप में रहने के लिए पर्याप्त गर्म होगा (अगर 42 डिग्री सेल्सियस पर जमना शुरू हो जाता है)।

मिश्रित इनोकुलम को एक इनोकुलेटिंग लूप के साथ अगर-युक्त मीडिया ट्यूबों की एक श्रृंखला के पहले में रखा जाता है और अच्छी तरह से हिलाया जाता है। यह पूरे माध्यम में कोशिकाओं को फैलाता है।

फिर लूप को फ्लेम-स्टरलाइज़ किया जाता है और दूसरी ट्यूब में स्थानांतरण के लिए पहली ट्यूब से एक नमूना लिया जाता है। इस प्रक्रिया को तीसरी बार दोहराया जाता है, और संभवतः, चौथी बार-एक प्रक्रिया जिसे सीरियल कमजोर पड़ने कहा जाता है। श्रृंखला की प्रत्येक ट्यूब में पिछली ट्यूब की तुलना में कम रोगाणु होते हैं।

यदि तकनीक ठीक से की जाती है, तो श्रृंखला में अंतिम ट्यूब में सबसे कम अलग-अलग कोशिकाएं होंगी, ट्यूबों की सामग्री को तब बाँझ पेट्री प्लेटों में डाला जाता है और जमने दिया जाता है।

चूंकि कोशिकाओं को पूरे माध्यम में फैलाया गया है, इसलिए अगर की सतह पर, अगर के भीतर, और अगर के नीचे कॉलोनियां विकसित हो सकती हैं। सतही कालोनियों को शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव के लिए चुना जा सकता है, लेकिन अगर के भीतर इस उद्देश्य के लिए पहुंचना अधिक कठिन है।

शुद्ध अलगाव के अलावा, मूल नमूने में व्यवहार्य (जीवित) कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए डालना प्लेट विधि का उपयोग किया जा सकता है। गिनती में सबसे बड़ी सटीकता तब प्राप्त होती है जब प्लेटों में 30 से 300 कॉलोनियां होती हैं। तकनीक या संदूषण में त्रुटियों के कारण 300 से अधिक कॉलोनियों वाली प्लेट के गलत होने की संभावना है ।

एक पर्टि प्लेट की सतह पर एक कॉलोनी की उपस्थिति इस बात की गारंटी नहीं देती है कि कॉलोनी शुद्ध है। यह निर्धारित करने के लिए कई प्रक्रियाएं की जानी चाहिए कि शुद्ध संस्कृति तकनीक सफल रही है।

सूक्ष्म विश्लेषण, और शारीरिक और कॉलोनी विशेषताओं का निर्धारण यह पुष्टि करने के लिए किया जाना चाहिए कि रोगाणुओं को मूल मिश्रण से सफलतापूर्वक अलग कर दिया गया है।

ग्राम स्टेनिंग तकनीक एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है, जैसा कि इस अध्याय में बाद में वर्णित अन्य धुंधला तरीके हैं। एक सूक्ष्म जीव की शारीरिक विशेषताओं को विभिन्न पोषक तत्वों में शुद्ध संस्कृति के नमूनों को रखकर और सूक्ष्म जीवों की आबादी की जैव रासायनिक रूप से उपस्थिति के रूप में पाया जाता है क्योंकि यह ठोस माध्यम की सतह पर बढ़ता है।

इन विशेषताओं का वर्णन करने के लिए सूक्ष्म जीवविज्ञानी द्वारा विशेष शब्दावली का उपयोग किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, वृद्धि की मात्रा को मामूली, मध्यम या प्रचुर मात्रा में वर्णित किया जा सकता है। बहुत अच्छी तरह से विकसित होने वाली कॉलोनियां अपारदर्शी, पारदर्शी या पारभासी दिखाई दे सकती हैं।

अगर की सतह पर कॉलोनी के रूप को गोल, फिलामेंटस, राइज़ोइड, या जटिल कहा जा सकता है। कई जीवाणुओं के माध्यम से भी इनमें से कोई भी वृद्धि विशेषता प्रदर्शित हो सकती है; कोई भी दो जीवाणु प्रजातियां विशेषताओं का समान संयोजन प्रदर्शित नहीं करती हैं। यह तथ्य सूक्ष्म जीवविज्ञानी को सापेक्ष आसानी से एक विशेष सूक्ष्म जीव को विशिष्ट रूप से चिह्नित करने में सक्षम बनाता है।


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