सूक्ष्म जांच के लिए सूक्ष्मजीवों की स्लाइड तैयार करने और चुनिंदा धुंधलापन पर उपयोगी नोट्स | Useful Notes On Preparing Slides Of Microbes And Selectively Staining For Microscopic Examination

Useful Notes on Preparing Slides of Microbes and Selectively Staining for Microscopic Examination | सूक्ष्म जीवों की स्लाइड तैयार करने और सूक्ष्म परीक्षण के लिए चुनिंदा धुंधलापन पर उपयोगी नोट्स

रोगाणुओं की स्लाइड तैयार करने और उन्हें चुनिंदा रूप से धुंधला करने की बात सूक्ष्म जांच के लिए है। बढ़े हुए या बढ़े हुए रोगाणुओं को देखकर बहुत सी जानकारी प्राप्त की जा सकती है।

सूक्ष्म जीवविज्ञानी न केवल सूक्ष्म जीव के आकार और आकार को निर्धारित करने में सक्षम है, बल्कि विभिन्न रोगाणुओं की धुंधला प्रतिक्रियाओं से कई रासायनिक विशेषताओं का पता लगाया जा सकता है। सामान्यतः प्रयोगशाला में दो प्रकार की सूक्ष्म स्लाइड तैयारियां वेट माउंट और ड्राई माउंट (स्मीयर तैयारी) होती हैं।

एक मानक गीला माउंट नमूना माइक्रोसेपिस्ट को पानी की एक बूंद में निलंबित बड़े रोगाणुओं की जांच करने में सक्षम बनाता है। किसी भी ग्रीस फिल्म को हटाने के लिए फ्लैट, कांच माइक्रोस्कोप स्लाइड को अच्छी तरह से साफ किया जाता है, और पानी की एक बूंद स्लाइड पर रखी जाती है।

जिन जीवों की जांच की जानी है, उन्हें सड़न रोकने वाली तकनीक का उपयोग करके स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, और ऊपर एक कवर ग्लास रखा जाता है। जीवित कवक, प्रोटोजोअन और शैवाल का अध्ययन यह निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है कि वे गतिशील हैं या नहीं, और कौन सी कोशिका व्यवस्था बन सकती है।

बैक्टीरिया जैसे सूक्ष्म जीवों के छोटे आकार के कारण, मानक गीले माउंट का उपयोग करके कोशिकाओं को तेज फोकस में लाना बहुत मुश्किल होता है। इस समस्या को हल करने के लिए, एक विकल्प का उपयोग किया जाता है जिसे हैंगिंग ड्रॉप स्लाइड तैयारी कहा जाता है।

इस स्लाइड को तैयार करने के लिए, पेट्रोलियम जेली की थोड़ी मात्रा को साफ कवर ग्लास के कोनों पर रखा जाता है, और एक इनोकुलेटिंग लूप का उपयोग संस्कृति के नमूने को कांच के केंद्र में असमान रूप से स्थानांतरित करने के लिए किया जाता है।

इसकी सतह में एक अवसाद के साथ एक विशेष सूक्ष्मदर्शी स्लाइड को तब कवर ग्लास के ऊपर अवसाद में केंद्र मरने के नमूने के ऊपर रखा जाता है। पूरी की गई स्लाइड को फिर दाईं ओर फ़्लिप किया जाता है और जांच के लिए माइक्रोस्कोप पर रखा जाता है।

इस तरह से तैयार किए गए अध्ययन उतनी तेजी से नहीं सूखेंगे, और वे सूक्ष्मदर्शी को आसानी से रोगाणुओं को उनके सामान्य आकार से एक हजार गुना बड़ा करने की अनुमति देते हैं।

सूखी स्लाइड भी दो तरह से बनाई जा सकती हैं। नकारात्मक स्मीयर तैयारी का उपयोग उन रोगाणुओं की जांच के लिए किया जा सकता है जिन्हें सामान्य प्रयोगशाला दागों से रंगना मुश्किल होता है।

यह तैयारी तकनीक कोशिकाओं की रासायनिक प्रकृति के बारे में बहुत कम जानकारी प्रदान करती है लेकिन कोशिकाओं के सटीक आकार और आकार को निर्धारित करने में बहुत उपयोगी है। एक साफ, सपाट कांच की स्लाइड के अंत में रासायनिक निग्रोसिन या भारतीय स्याही की एक छोटी मात्रा रखी जाती है।

रोगाणुओं को इस रसायन में एक इनोकुलेटिंग लूप के साथ मिलाया जाता है, और दूसरी ग्लास स्लाइड का उपयोग स्लाइड की सतह पर निलंबित कोशिकाओं को फैलाने के लिए किया जाता है। चूंकि निलंबन स्लाइड को कवर करता है, यह जल्दी से एक अंधेरे फिल्म में सूख जाता है जिसे कवर ग्लास के बिना जांचा जा सकता है।

निग्रोसिन और भारतीय स्याही कोशिका की सतह से चिपकते नहीं हैं, लेकिन केवल सूक्ष्म जीवों को घेरते हैं, जो सूक्ष्मदर्शी के माध्यम से देखे जाने पर गहरे भूरे-बैंगनी रंग की पृष्ठभूमि में चमकदार छोटी छड़, कोक्सी या सर्पिल के रूप में दिखाई देते हैं।

अन्य सूखी स्लाइड तकनीक स्मीयर तैयारी है, जो धुंधला होने की तैयारी में एक साफ कांच की स्लाइड पर रोगाणुओं का एक नमूना रखने की एक विधि है। तरल मीडिया से संस्कृति को इनोकुलेटिंग लूप के साथ स्लाइड पर रखा जाता है, जबकि ठोस मीडिया (पेट्री प्लेट्स, या तिरछी) से उन लोगों को सुई लगाकर बाँझ पानी की एक बूंद में स्थानांतरित किया जाता है।

नमूने को स्लाइड की सतह पर लिप्त किया जाता है और हवा में सूखने दिया जाता है। धुंधला होने की प्रक्रिया के दौरान कोशिकाओं को धुलने से रोकने के लिए, स्लाइड को कोशिकाओं को स्लाइड में हीट-फिक्स करने के लिए जल्दी से एक बन्सन बर्नर लौ के माध्यम से पारित किया जाता है।

हीट-फिक्स्ड स्मीयर की तैयारी लंबे समय तक रखी जा सकती है, क्योंकि कोशिकाओं को मार दिया गया है और कांच की सतह पर तय किया गया है। हालाँकि, चूंकि कोशिकाएँ छोटी होती हैं और उनमें पानी का प्रतिशत अधिक होता है, इसलिए मारे गए, बिना दाग वाले जीवाणुओं की जांच करके बहुत कम जानकारी प्राप्त की जा सकती है।

आंतरिक संरचनाओं की पहचान करने और रोगाणुओं की रासायनिक प्रकृति के बारे में कुछ जानने के लिए, सूक्ष्मदर्शी जांच से पहले दाग को धब्बा में जोड़ा जा सकता है।

आमतौर पर लैब में इस्तेमाल की जाने वाली दो स्टेनिंग मेथड हैं सिंपल स्टेन और डिफरेंशियल स्टेन। सरल धुंधला प्रक्रिया में केवल एक डाई का उपयोग किया जाता है, जबकि अंतर तकनीक सेल भागों या सेल प्रकारों के बीच के अंतर को उजागर करने के लिए एक से अधिक दाग का उपयोग करती है।

सूक्ष्मजीवविज्ञानी कार्यों में सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले रंगों को धनायनित रंजक के रूप में जाना जाता है, क्योंकि उनके आयनों के रंगीन भाग में धनात्मक आवेश होता है। स्टेन मेथिलीन ब्लू मेथिलीन क्लोराइड (CH, C12) है।

अणु के रंग युक्त भाग को क्रोमैटोफोर कहा जाता है, जबकि गैर-वर्णक युक्त आयन को ऑक्सोक्रोम कहा जाता है। जब डाई को जीवाणु कोशिकाओं की सतह पर धोया जाता है, तो धनात्मक रूप से आवेशित मेथिलीन आयन (क्रोमैटोफोर) रासायनिक रूप से नकारात्मक विद्युत आवेश के साथ जुड़ जाएगा जो आमतौर पर कोशिकाओं की सतह पर होता है।

अधिक सामान्यतः, इन रंगों को मूल रंग कहा जाता है। अम्लीय रंगों (जैसे सोडियम इओसिनेट) में एक नकारात्मक चार्ज क्रोमैटोफोर होता है और यह सतह से नहीं जुड़ेगा। सरल धुंधला एक बहुत तेज़ तरीका है।

स्मीयर की तैयारी को हीट-फिक्स करने के बाद, डाई को सतह पर डाला जाता है और इसलिए लगभग 45 सेकंड तक रहने दिया जाता है। फिर इसे पानी से धो दिया जाता है, और स्लाइड को धीरे से सुखाया जाता है। आमतौर पर जीवाणु कोशिकाओं के लिए उपयोग किए जाने वाले अन्य साधारण दागों में क्रिस्टल वायलेट, सफ़्रानिन और कार्बोल्फ़ुचिन शामिल हैं।

संयोजन में लागू होने पर इन समान रंगों का उपयोग विभेदक धुंधला तरीकों के लिए किया जा सकता है। प्रत्येक विशेष डाई को कुछ सेल भागों या कुछ सेल प्रकारों के साथ चुनिंदा प्रतिक्रिया करने की क्षमता के आधार पर चुना जाता है।

ग्राम दाग दो प्रमुख जीवाणु कोशिका प्रकारों, ग्राम पॉजिटिव और ग्राम-नकारात्मक के बीच अंतर दिखाने के लिए क्रिस्टल वायलेट, ग्राम आयोडीन, अल्कोहल और सेफ्रेनिन का उपयोग करता है।

ध्यान रखें कि “ग्राम दाग” नामक कोई एकल डाई नहीं है, लेकिन यह अंतर धुंधला तकनीक है जिसमें कई रसायनों के उपयोग की आवश्यकता होती है।

तीन अन्य उपयोगी तरीके एसिड-फास्ट, एंडोस्पोर और कैप्सुलर स्टेनिंग हैं। इन सभी विधियों को एक निर्दिष्ट क्रम में स्मीयर तैयारियों पर किया जाता है।

एसिड-फास्ट स्टेन विधि ग्राम विधि के समान है जिसमें यह धुंधला होने के बाद सेल प्रकारों की क्षमता पर आधारित है और माइक्रोबायोलॉजिस्ट को रोगाणुओं को वर्गीकृत करने में सक्षम बनाता है।

एसिड-फास्ट बैक्टीरिया (AFB) गर्म कार्बोफुचिन के साथ धुंधला होने के बाद एसिड-अल्कोहल (HC1 +95% एथिल अल्कोहल) के साथ आसानी से विघटित नहीं होते हैं क्योंकि इन बैक्टीरिया में एक मोटी, मोमी लिपिड सामग्री होती है जो कोशिका झिल्ली के माध्यम से डाई को हटाने से रोकती है। डाई डालने के बाद ये एएफबी कोशिकाएं क्षतिग्रस्त हो जाती हैं, एसिड-अल्कोहल लाल डाई को हटा देगा और सेल गैर-एसिड-तथ्य प्रतीत होगा।

इस धुंधला विधि का उपयोग नैदानिक ​​प्रयोगशाला में माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस (तपेदिक का कारण) और माइकोबैक्टीरियम लैप्रे (कुष्ठ रोग का कारण) जैसे बैक्टीरिया की पहचान के लिए किया जाता है।

एसिड-फास्ट तकनीक में उन कोशिकाओं को रंगने के लिए एक काउंटरस्टैन का उपयोग किया जाता है जो गैर-एसिड-फास्ट हैं और एसिड-अल्कोहल द्वारा रंगहीन हो गए हैं। चूंकि एसिड-फास्ट कोशिकाएं कार्बोफुचिन लाल होती हैं, इसलिए आमतौर पर मेथिलीन ब्लू में इस्तेमाल होने वाले काउंटरस्टैन का उपयोग किया जाता है।

यदि एसिड-फास्ट (माइकोबैक्टीरियम) और नॉन-एसिड-फास्ट (जैसे, स्ट्रेप्टोकोकस) बैक्टीरिया के मिश्रण को एक ही स्लाइड पर दाग दिया जाता है, तो माइकोबैक्टीरिया लाल बेसिली और स्ट्रेप्टोकोकी नीले रंग के रूप में दिखाई देगा। यह धुंधला प्रक्रिया सेल प्रकारों में अंतर दर्शाती है, जबकि एंडोस्पोर और कैप्सुलर दाग सेल भागों में अंतर प्रदर्शित करते हैं।

बेसिलस और क्लोस्ट्रीडियम जेनेरा द्वारा उत्पादित एंडोस्पोर्स अधिकांश रंगों के लिए रासायनिक रूप से प्रतिरोधी होते हैं। इसलिए, वनस्पति कोशिकाओं के अंदर उनकी उपस्थिति को उजागर करने के लिए एक विशेष धुंधलापन का उपयोग किया जाना चाहिए।

शेफ़र-फुल्टन विधि प्रतिरोधी एंडोस्पोर्स को रंगने के लिए गर्म मैलाकाइट हरे रंग के दाग का उपयोग करती है और आसपास की वनस्पति कोशिका को रंगने के लिए कोल्ड सफ्रेनिन (लाल) का उपयोग करती है। जब यह धुंधला करने की प्रक्रिया पूरी हो जाती है, तो एंडोस्पोर बनाने वाली कोशिकाओं में गुलाबी साइटोप्लाज्म और हरे रंग के एंडोस्पोर दिखाई देंगे।

बैक्टीरिया के कैप्सूल को प्रदर्शित करने के लिए, क्रिस्टल वायलेट का उपयोग शपथ तैयारी में कोशिकाओं को दागने के लिए किया जाता है। कॉपर सल्फेट को फिर स्लाइड के ऊपर से धोया जाता है और स्लाइड को हवा में सुखाया जाता है।


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